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聚合物基质的填充物一般用亲水性凝胶
色谱法在核酸纯化中的应用
通常在色谱分析前,需要进行裂解后的分离或富集。富集方法
需要使用乙酸铵和聚乙二醇沉淀法来进一步去除宿主蛋白以及小分
子核酸。与此同时,这些方法也在色谱提纯前减少了样本或处理液
体的体积,而分离过程也同样需要离心和过滤以去除细胞碎片:
色谱法可相对容易地进行优化并按比例增大,而且许多质粒特
征,如电荷数和大小可以通过特定的设计得以区分。
小颗粒留在了凝胶的孔穴里,而大分子则直接通过排阻色谱法
适用于将小的环状DNA与大的质粒分离或者将无机盐及一些小分子
从生物大分子中去除,同时也可去除荧光标记反应混合物中游离的
荧光标记的核酸。排阻色谱法的主要缺点在于在分离限制酶断片时
存在上限,单一的凝胶柱并不能提纯所有的核酸。
排阻色谱法中常用亲水层包裹的网状聚合基质或硅胶颗粒基质
,硅胶颗粒的缺点在于会通过吸附造成溶质的保留,并可能会造成
溶质分子的降解为降低吸附量,这些硅胶颗粒通常与有机衍生物反
应进行修饰:
聚合物基质的填充物更常用,一般用亲水性凝胶,可使用水溶
液对核酸进行洗脱。这些凝胶是相对惰性的,其交联程度决定了孔
径的大小葡聚糖、聚丙烯酰胺和琼脂是三种比较常见的交联聚合物
。Amersham Biosciences出售的交联葡聚糖,商品名为Sephadex,
其根据在水中膨胀时保水量进行分类;
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