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硅胶颗粒表面包裹着季胺等强配体聚合物颗粒
阴离子交换色谱法
阴离子交换色谱过程中,带负电荷的核酸被吸附于带正电荷的
固定相中,它们在树脂中被离子强度更大的流动相置换。DNA被吸
附到阴离子交换硅胶基质中,而RNA、蛋白质以及其他细胞成分则
被洗脱。与体积排阻色谱一样,离子交换色谱常用的两种基质也是
硅胶或聚合物,例如,二乙氨基乙醇(DE—AE)等弱阴离子交换配体
修饰的硅胶颗粒,表面包裹着季胺等强配体的聚合物颗粒
阴离子交换树脂有多孔性和非多孔性两种基质。有报道指出
一种非多孔性微粒(<5wn)阴离子交换可洗脱出高达12000bp的DNA限
制酶断片和寡核苷酸。不同孔径的多孔树脂可,于更高或更低分子
量的核酸分离,孔的大小应足够使核酸能够通过,固定相也应提
供足够的表面积,因此,大孔径树脂(>4000A)适用于分子量较高的
DNA限制酶断片。阴离子交换柱常用的洗脱流动相为Tris一氯化钠
和PBS等缓冲液,提纯的DNA洗脱后就要进行测序。许多厂家在包装
试剂盒里提供了吸附剂,与酚氯法和体积排阻色谱法相比,这种方
法更便捷,产率更高。
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