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细胞牵引力细胞在迁移过程中对底物产生牵引力
细胞牵引力细胞在迁移过程中对底物产生牵引力,这种牵引力可在
整个细胞或细胞局部下面检测。基本方案1 检测细胞在起皱底物上的
牵引力材料目的细胞对目的细胞专用的培养液,不含酚红,添加20~50
mmol/L HEPES二甲聚硅氧烷无酚红培养液,用家用真空器除气
显微镜载物台温度控制系统(或头发吹风机和控制器)盖玻片,用酸洗过Petri
皿,比盖玻片稍大配有录像系统的倒置显微镜(装有长距离工作目镜)或
正置显微镜(装有多液体浸渍目镜)显微操作仪(可作三维调节,如Nanis
hige),装有持针器(World Precision In—struments)已校准的微型针
计算机,装有合适的电视图像捕获卡和图像分析软件(如NIH Image,可
用匿名Macintosh计算机,装有Scion图像捕获运行器1.将二甲聚硅氧
烷液注于干净的盖玻片上,扩展形成一薄层,厚20~50微米。将本生灯
炉头的燃料气体量调至最小。然后,将盖玻片的二甲聚硅氧烷液面朝下
,用镊子夹持盖玻片,使盖玻片穿过火焰上部约1.5s。交联时间会影
响二甲聚硅氧烷片的硬度。本方法的典型交联只发生在二甲聚硅氧烷液
的最上层(厚1微米)。聚硅氧片自然形成许多皱褶,变得不透明。但是
,聚硅氧片冷却时,在5~20s内变得透明。*厘沲,运动黏度单位。2.
如果细胞不是在室温条件下培养,在用于测量的显微镜载物台上调整好
细胞培养温度。3.用不含酚红且添加20~50 mmol/L HEPES的常用培
养液接种细胞或分离原代细胞。4.如果细胞可以传代,用胰蛋白酶和E
DTA混合液轻度消化细胞(单元1.1),从而自培养器皿内取出细胞。然
后,加入较多的添加HEPES和血清(或BSA)的除气无酚红培养液,使胰蛋
白酶失活。用同样培养液混悬细胞。5.将盖玻片放入Petri皿(稍大于
盖玻片),液体面朝上。向Petri培养皿加入除气培养液,深度≥o.5 c
m。
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