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分配层析和亲和分配在DNA纯化中的应用
染色体和核蛋白 二醇系统分离染色体脱氧核蛋白,通过单步
分配获得了不同的非组蛋白/DNA比的核蛋白的部分分离。用逆流
分配制作了脱氧核蛋白组分的谱线。
Pianev等(1979)研究了染色体的分配。用带电荷聚乙二醇(带
负电S-PEG或带正电TMA-PEG)能将染色体从一相转移至另一相。发
现了一定的选择性。
此操作的含义指的是将一相用另一相萃取多次,通过改变萃取
相的组成就能有选择性地将混合物中不同组分一个接一个地萃取出
来。在第四章中已讨论过的确定分配系数的各种不同因素,如离子
组成、聚合物浓度、萃取相中聚合物分子量和温度等会引起分配系
数改变,也可采用萃取相聚合物(一般为PEG)的电性如带电荷PEG或
在PEG上接有疏水性及生物专一性基团来引起分配系数的变更。对
膜蛋白的情况可用去污剂来完成上述作用。
细菌提取液的萃取曲线。大肠杆菌首先分配于含有高浓度NaCI
的葡聚糖—聚乙二醇相系统,此时核酸分配于下相,而蛋白质则分
配于上相。每用一新的萃取液时其中NaCl的含量是递减的,四步萃
取后,用不含NaCI的上相,然后再用合适离子组成的上相来萃取DN
A和高分子RNA。
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