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本文标题："载体分子中最好具有两个以上容易检测的标记"
新闻来源：未知 发布时间：2017-2-26 0:39:15 本站主页地址：http://www.jiance17.com
载体分子中最好具有两个以上容易检测的标记
DNA的克隆是指在体外将含有目的基因或其他有意义的DNA片段与能
够自我复制的载体DNA连接，然后将其转入宿主细胞或受体生物使
其增殖或进行表达的分子操作过程，因此DNA克隆又称分子克隆、
基因操作或重组DNA技术。DNA克隆涉及一系列的分子生物学技术，
如目的DNA片段的获得、载体的选择、各种工具酶的使用、体外重
组、导人宿主细胞技术和重组子筛选技术等。
一、目的DNA片段的获得
DNA克隆的第一步是获得包含目的基因在内的一群DNA分子，这
些DNA分子或来自目的生物基因组DNA或来自目的细胞mRNA反转录合
成的双链cDNA分子。由于基因组DNA太大，不能够完整克隆，因此
必须将其处理成适合克隆的DNA小片段，常用的方法有机械物理切
割和限制性内切核酸酶消化。若基因序列已知而且比较小就可以人
工直接化学合成。如果基因的两端部分序列已知，根据已知序列设
计引物，从基因组DNA或cDNA中通过PCR或RT-PCR技术就可以获得目
的基因。
二、载体的选择
基因工程的载体应具有一些基本的性质。①在宿主细胞中有独
立的复制和表达能力，这样才能使外源重组的DNA片段得以扩增。
②分子质量尽可能小，以利于在宿主细胞中有较多的拷贝，便于结
合更大的外源DNA片段。同时在实验操作中也不易被机械剪切而破
坏。③载体分子中最好具有两个以上容易检测的遗传标记(如抗药
性标记基因)，以赋予宿主细胞不同的表型特征(如对抗生素的抗性
)。④载体本身最好具有尽可能多的限制性内切核酸酶单一切点，
为避开外源DNA序列中限制性内切核酸酶位点的干扰提供更大的选
择范围。若载体上的单一酶切位点位于检测表型的标记基因之内可
造成插人失活效应，则更有利于重组子的筛选。 ，
DNA克隆常用的载体有：质粒(plasmid)载体、噬菌体(phage)
载体、柯斯质粒(cosmid)载体、单链DNA噬菌体(ssDNA phage)载体
、噬粒(phagemid)载体及酵母人工染色体(YAC)等。从总体上讲，
根据载体的使用目的，载体可以分为克隆载体、表达载体、测序载
体、穿梭载体等。
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