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亚细胞分离的研究可确定一种蛋白质是否定位于正确的细胞器中。
在大肠杆菌中,通过对细菌细胞进行渗透压休克能够较为容易地获
得胞质中的组分。通过超声波或采用French压迫细胞使细胞裂解后
,通过差速离心将细胞膜分离出来。内膜和外膜通过等密度蔗糖梯
度离心彼此分开。大肠杆菌的四个亚细胞器(细胞质、内膜、周质
和外膜)会出现交叉污染。特定细胞器中唯一存在的标志蛋白可用
来判断是否发生交叉污染及是否分离出正确的细胞器。OmpA是外膜
的标志蛋白;麦芽糖结合蛋白或碱性磷酸化酶前体是胞质的标志蛋
白;NADH氧化酶是内膜的标志蛋白;6一磷酸葡萄糖脱氢酶是细胞
质的标志蛋白。
真核细胞
蛋白质向内质网腔中的转运可以通过监测酵母细胞中信号肽的
切除和糖基化来确定。
完成细胞膜转运之后,前体蛋白的信号肽被信号肽酶切除。
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