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DNA分子切割链接的方法各不相同-载体分子类型
构建了基因文库,可以说是实现了基因的克隆,但还没有完成目的
基因的分离。因为在上述方法构建的基因文库中,并不知道其中哪一个
克隆含有所要研究的目的基因。因此,克隆一个基因的下一个步骤是从
基因文库中筛选出含有目的基因的特定克隆。对于编码产物已知的目的
基因,可以应用互补的核苷酸序列作探针进行筛选,而该探针设计可以
按同源基因序列,或者是根据编码的蛋白质氨基酸序列推导而设计。也
可以应用相应蛋白质抗体和蛋白质功能测定,来筛选克隆基因的编码蛋
白质产物,以此间接筛选目的基因。
由于DNA分子的切割与连接方法各不相同,载体分子的类型又各种
各样,究竞选择何种克隆途径主要取决于实际情况。质粒载体(或噬菌
体载体)和大肠杆菌宿主细胞是常用的基因克隆体系。
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