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吸去培养液,使细菌沉淀尽可能干燥。除去上清的简便方法是用一
次性吸头与真空相连,用吸头接触液面,轻缓抽吸。当液体从管中吸出
时,尽可能使吸头远离细菌沉淀,然后继续用吸头吸去附于管壁的液滴
。
碱裂解提取
1.将细菌沉淀重悬于100μL,冰预冷的溶液I中,用旋涡混合器剧
烈振荡。须使细菌在溶液I中完全分散,为此将两个微量离心管的底部
互相接触并置于旋涡混合器上,同时进行振荡,可使沉淀迅速分散。对
于有些菌株,细菌的细胞壁成分会散落在培养基中,这些成分可能抑制
限制酶的活性,为此将细菌沉淀重悬于0.5mL STE溶液,离心,所得沉
淀再如上所述重悬于100pI,冰预冷的溶液I中。
2.加入200t-L新配制的溶液Ⅱ。盖紧管口,快速颠倒离心管5次,
以混合内容物。应确保离心管的整个内表面均与溶液Ⅱ接触。不要振荡
,将离心管放置于冰上。
3.加入150tm用冰预冷的溶液Ⅲ。盖紧管口,将小离心管倒置后温
和地振荡10s使溶液Ⅲ在粘稠的细菌裂解物中分散均匀,之后将离心管
置于冰上3~5min。
4.微量离心机于4℃以15000r/rain离心5min,将上清液转移到另
一离心管中。
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