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细菌染色方法
革兰染色法
(1)玻片菌膜制法:
①涂片:取经脱脂并干燥(74 mm x 26 mm×1 mm)载玻片一块,
加适量无菌生理盐水,取少许菌苔于其中研匀并涂成1 cm×2 cm的
菌膜;液体培养物可直接涂片。
②干燥:置室温或温箱或火焰上方助其干燥。
③固定:将已干的菌膜在火焰上迅速来回通过3次(以不烤焦菌
膜为度),把菌烤死并固定在玻片上。
(2)革兰染色方法:向已固定好的菌膜滴加结晶紫染液染1分钟
,水洗;加革兰碘液染≥1分钟,水洗;用95%乙醇脱色,至菌膜
上无颜色脱下为止,水洗;然后加稀释石炭酸复红液染30秒至1分
钟,水洗,待干。滴镜油,用油镜观察菌体的形态。
染色结果:革兰阳性菌为紫蓝色,革兰阴性菌为紫红色。
(3)注意事项:
④涂片不宜过厚,火焰固定时温度不宜过高。
②应定期检查各种染色液质量,以免发生染色结果误差。
③染色结果正确与否,除技术原因外,与菌龄和溶液pH值关系
较大。幼龄菌或pH值较高易染成阳性,衰老菌或pH值较低易染成阴
性结果。
2.单染色法在工作中,为了节约时间,对已知的革兰阳性或
阴性菌,也可直接用一种染液(结晶紫或复红)染相应时间后,水洗
、待干,镜检的做法。
3.芽胞染色法
(1)染色液:
①5%孔雀绿溶液。
②稀释石炭酸复红(革兰第4染液)。
(2)玻片菌膜用火焰固定后,用孔雀绿染液(先盖2层新华1号滤
纸以除杂质)56℃染30分钟,水洗;复红液染1分钟,水洗;自然干
燥,油镜镜检。
(3)结果:芽胞呈紫蓝绿色,菌体呈红色。
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