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器材
除了微粒体的沉淀以外,所有的差速离心都能在冷冻高速离心机中
进行。为了将小颗粒对沉淀物的污染降到最小限度(见上文),与吊桶式
转子相比更推荐使用固定角转子(管体积相同),因为它们在凹液面和管
底之间的沉降路径更小,离心力的差距也小[¨,16]。很明显,转子的
角度越小(对于垂直方向来说),分离的效率越高,但是小角度的另一个
影响——沉淀趋于堆积得较松散,界限不明确,这是一个缺点。实际上
,大约30。的转子是个折中的办法。除了沉淀细胞核(第一步)这个唯一
的特例之外,都推荐使用固定角转子;倾向于在这一步中使用吊桶式转
子只是由于它常规地用于低速离心机(低速离心机主要匹配于这种转子)
。此外,核与下一个最大的细胞器(线粒体)之间的沉降率差距如此之大
,以至于转子的种类不再那么重要了。
密度梯度离心
现在广泛认为,特别是对于一些可以在相对较低的离心力(1000g~
15000g)下沉淀的较大细胞器(细胞核、线粒体、溶酶体和过氧化物酶体
)来说,在吊桶式转子长沉降路径下以1000009以上的转速,使用黏稠、
高渗的蔗糖梯度溶液,既不方便也对细胞器有潜在的伤害。因此,显著
地趋向于使用低黏稠度梯度介质如Nycodenz@或碘克沙醇,这些梯度溶
液与蔗糖溶液(或甚至等渗的溶液)相比有更低的摩尔渗透压浓度。尽管
传统的吊桶式转子仍然被广泛地用于密度梯度离心,垂直或接近垂直转
子的短沉降路径不仅减少了离心时间,也将梯度溶液中强加于颗粒之上
相当大的流体静压的影响降到了最小。
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