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液体介质中用剪切的方法从支撑基质中释放细胞
机械法分离组织
在液体介质中用剪切的方法从支撑基质中释放细胞,这样分离出的
细胞群可能含有很多血红细胞,而有核细胞的活力由于机械损伤作用会
比较低。然而,大部分的分离方法都需要用机械方法,把组织切成小块
以增加酶消化的表面积,并且使酶更容易进入组织中。软组织可以很容
易被剪刀剪碎,较硬的组织就需要用手术刀片剪碎。从剪碎了的组织碎
片中进一步释放细胞需要在悬液中使用吸管反复吹打组织碎片以形成的
足够大剪切力,将细胞从组织上分离下来。
必须确定组织样品相关的生物危害性,并使用适当的设备避免这种
危害。在以下的实验方案中,均使用Ⅱ级生物安全柜,以保护使用者及
组织免受污染。推荐使用无菌操作,可保证储存介质保持无菌,降低由
于微生物存在而产生的结果不确定性。如果进行细胞培养,无菌操作则
是非常必要的。
(2)器材
所有直接接触组织的器材必须灭菌。
组织剪(注:在培养皿中,使用弯剪比直剪更易于沿其表面修剪,
从而提供更大的修剪空间)
镊子
一次性手术刀
玻璃平皿(注:解剖器具会损坏塑料平皿,碎屑可能会损伤细胞)
巴斯德吸管(短型和长型)
标注体积刻度的试管(圆锥形底)
试管架
台式离心机
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