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基本操作
细菌是海洋中微型生物的主要组成者之一。以下操作介绍以细
菌样品为例,工作模式以液体环境下的轻敲模式为例。
样品准备
对于纯培养的菌株,指数后期取样时菌液的浓度大约是是108
cells/mI。,取1毫升菌液.用蒸馏水悬浮.以2000~3000 rpm的
转速离心洗去碎屑和盐分,未经充分洗净的胞外多糖对成像也有较
大的影响。
细菌在液体池中容易漂浮,难以和基底牢固结合。因此目前固
定通过电荷吸附的方
显微镜观察
样品制备好之后,将固定有样品的铁片置于AFM的载物台上,
可以选用100/微米-100微米扫描管,用接触模式的Si3N4探针进行
成像,将探针和液体池装好,逐步将探针逼近表面,当针尖和样品
比较接近时,调节激光光斑的位置,使光斑位于四相光电检测器中
心。之后切换到轻敲模式,调好针尖的震动频率,选择下针。整个
成像过程中尽量保持室温恒定,避免来自外界的震动源干扰。起始
的扫描范围是10肚m,频率1 Hz。首先在大范围10μm进行大范围扫
描以便选取合适的区域,然后通过软件操控,缩小扫描范围,同时
调节扫描频率,比例增益,积分增益,电压值等各项参数以获得清
晰的成像,观察细菌表面的细微结构。
在用轻敲模式扫描过程中,在时间因素影响不大的情况下,尽
量小的扫描速率可以减少针尖对样品的伤害,使针尖在反馈系统的
控制下更好的扫描样品表面,获得更真实的采样点信息。在扫描的
过程中,图像从四个不同的扫描角度分别扫描多次,以避免扫描过
程中的假象,每个区域都通过扫描获得三至四幅高质量的图像,并
从中选取具有代表性的一张。
图像分析
扫描获得的图像可以进行三维变换处理,获得更直观的三维形
貌,并通过后台软件对样品表面的粗糙度,黏附性等物理性质进行
分析
原子力显微镜技术的特点与优势
在海洋中不同的温、盐、压力、酸碱条件和光强等环境因子的
相互作用促成了海洋超微型生物的形态和表面结构的多样性。在对
复杂多变的自然环境的适应过程中,超微型生物形态的多样性反应
了其对环境的特殊响应和潜在生理变化过程,具有重要的研究意义
。然而,在对超微型生物的研究发展过程,如何尽量真实的反映研
究对象的生活状态,最大限度的减小人为因素的干扰是科研人员一
直追求的目标。
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