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用Ti质粒转化植物细胞的途径一旦获得了带有有用外源基因的重组
Ti质粒,下一步的工作就是利用这些质粒DNA去转化植物细胞。最
直接的转化方法当然是用含有这种Tj质粒的根癌农杆菌品系去感染
寄主植物的伤口,使之形成冠瘿瘤。在这一过程中,Ti质粒的T一
区DNA就会转移并整合到一部分冠瘿瘤细胞中。被转化的肿瘤细胞
由于具有能够在没有外源植物激素的条件下离体生长的特性,因此
可以在不含激素的培养基上筛选出来,然后进行单独培养。这些细
胞在一定的条件下能够增殖形成愈伤组织,并进一步分化再生出植
株来。这样的植株就有可能代表了被转化的细胞的分化产物,并可
能在育种中是有用的。
除了细菌感染以外,也可以通过各种途径用Tj质粒去转化离体
培养的植物细胞或原生质体。相比之下,这种离体转化途径具有一
定的优越性。由于转化发生在单个的细胞中,通过选择而获得的由
这样的转化细胞形成的愈伤组织以至再生植株都由遗传背景一致的
细胞组成,而通过整体植株感染得到的肿瘤则是一个由不同细胞组
成的混合体。如果肿瘤组织中仅含有少量被转化的细胞,则对于整
个组织来说,那些标记基因的表型就不易被察觉出来。以下主要介
绍用Ti质粒转化离体植物细胞的方法。
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