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光学显微镜组化中PAs法是靠测定过碘酸氧化产生的醛基,据认为这
个氧化步骤对相邻两碳原子上带有一对未被取代的游离羟基的糖残
基也有相当的特异性。用六亚甲四胺(又称亚甲胺)形成络合物的碱
性银溶液可用来测定醛基。现已广泛用于电镜技术中染PAS反应阳
性的结构。
1.具体操作步骤
(1)一般用多聚甲醛固定组织,用戊二醛固定从理论上讲可能
有引进醛基的危险,不能用丙烯醛。有人用四氧化溅后固定再去饿
,但最好不用。
(2)适当缓冲液洗组织,乙醇脱水,环氧树脂包埋,超薄切片
。
(3)切片于惰性金属载网(金网或镍网等),用l%过碘酸水溶液
室温处理20—2Stain。
(4)蒸馏水洗lOminX 3(也可在蒸馏水中过夜)。
(5)用双蒸水制备下液;A液,3%新鲜制备的六亚甲四胺(hexa
methylenetetμmine)溶液。B液,5%硝酸银℃液,5%四硼酸钠。
然后将5mi B液加入到100mi A液中,搅拌,使所生成的沉淀溶解,
再加入12miC液和lOOml双蒸水配成六亚甲四胺银溶液。
(6)将切片置六1gi甲四胺银溶液的液面上,盖好容器,避光于
60℃烘箱中染40—60min,或等切片显示出淡棕色为止。
(?)将容器遮盖好放冰箱,冷却后再把切片转到蒸馏水表面。
(8)用5%硫代硫酸钠洗5rain, 用蒸馏水洗2次。干燥后复染
或不复染,电镜观察。
2.对照
(1)省略第(3)步的过碘酸处理,切片无特异性染色。
(2)第(3)步前还原和烷化蛋白质的一SH基,可证明染色特异性
。
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