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③涂片。
1.包埋处理和超薄切片 为了获得系列切面,需要将组织脱
水后包埋在适宜的介质(石蜡)中以支撑材料防止材料在切片过程中
变形。这对于观察不同发育阶段组织的连续变化、花药中减数分裂
不同时期的花粉母细胞变异和体细胞中有丝分裂变化都是有用的。
冲洗程序包括以下步骤:
(1)冲洗固定后的组织在流水下完全冲洗24h(如果固定在金属
离子固定剂中)以洗去固定液中所有成分。
脱水:组织经过30%、50%、70%、80%、90%、95%和100
%等不同梯度系列的酒精中,每种浓度处理1h,最后在70%或纯酒
精中过夜。
(2)透明 由于石蜡不与脱水的酒精相混,需要使用另一个媒
介。用酒精脱水后,将组织采用酒精:氯仿梯度为3:1、1:1和1
:3的混合液分别处理,每步1h,最后保存在纯氯仿溶液中lo~30r
ain。
(3)渗透将低熔点的石蜡小片放入含有样品组织的容器内,盖
好保持37 C下48h。然后打开保持24h,放人45 C水浴锅中过夜,最
后转到55~60 C的水浴锅中。当石蜡溶解时,样品组织随着石蜡的
包埋而发生变化,最终将没有氯仿气味释放出来。
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