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稀释过程中会遇到潜在的细胞结块现象
在准备稀释梯度时,保持无菌状态非常重要。例如,转移样品
时,装有稀释空白液的试管口必须经过灼烧灭菌。必须使用灭菌的
1.0mL移液管(0.1mL刻度)或者可变体积的、配有灭菌塑料枪头的
移液枪在各个梯度之间转移液体。灭菌的移液管或移液枪枪头只可
以用1次,以后的操作都要换新的无菌移液管或移液枪枪头。移液
枪要用70%(体积分数)酒精进行表面擦拭消毒,并且每年要进行精
度校准。
稀释过程中会遇到一个问题:存在潜在的细胞结块现象。例如
,片球菌中某些酵母会分泌一种黏液使细胞结块,导致几个至20个
或以上的细胞聚集在一起。除非使用物理方法进行分散,否则这些
细胞结块就会给固体平板计数和数据的统计描述带来困难。为了将
细胞结块带来的误差降到最小,在梯度稀释过程中;每次转移液体
之前必须充分混匀后才能进行下一步稀释
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