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本文标题:"固相载体上特异同工酶分子数等于带有标记"

新闻来源:未知 发布时间:2016-10-3 13:44:32 本站主页地址:http://www.jiance17.com

固相载体上特异同工酶分子数等于带有标记

  酶联免疫吸附法(enzyme—linked immunosorbent assay,ELISA) 
 又称酶标免疫吸附法(enzyme.1aballed immunosorbent assay,EUSA
),属酶免疫法(enzyme immunologic assay,En)的一种,又可分为直
接法、间接法、竞争法和非竞争法,其中以非竞争性的夹心ELISA法较
为常用而灵敏,此法是将特异的同工酶抗体吸附在固相载体(常用聚苯
乙烯微孔反应板或珠子)上,加入样品后抗体与特异的同工酶结合,清
洗掉其他型别的同工酶,再用带有标记酶的相应抗体与固相载体上所结
合的同工酶结合,即固相载体上结合的特异同工酶分子数等于带有标记
酶的抗体分子数,也就等于标记酶的分子数,标记酶的活性强弱可间接
反映所结合的同工酶多少,测定标记酶的活性即代表所结合的同工酶活
性。由于所测的同工酶既与固相载体上的抗体结合,又与带有标记酶的
抗体结合,夹在2种抗体之间,故称为“夹心”酶联免疫吸附法。

  夹心ELISA尤其适用于测定有杂化亚基的同工酶。例如,测定CK-MB
时,先将抗M亚基的抗体固定聚苯乙烯微孔板上使抗体固相化,加入待
测样品后,样品中的CK-BB因不能与固相上的CK-M抗体结合而被洗去,
而CK-MB及MM被结合于固相上。经一定时间后再加人用酶(常用辣根过氧
化物酶或小肠脚)标记的抗CK-B亚基的抗体,此酶标抗体只能和固相上
的CK—MB结合,而不能与CK-MM结合。最后测定固相上的标记酶(√岫)
的活性,即可以标准曲线求知CK.MB的浓度。样品中的CK-MB愈多,结
合酶标的CK-B抗体愈多,固相上标记酶的活性也愈高。

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