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然蛋白质功能的研究通常只需要微量的蛋白质
要想成功的研究一种蛋白质的结构,纯化这种蛋白质分子是必需的
。通常这是一项巨大的任务,特别是蛋白质以低浓度(甚至少到每个细
胞10个分子)存在于细胞内时。纯化还经常包括从一种含有上万种不同
蛋白质的细胞中纯化一种蛋白质。理想的目标是获得单一蛋白质并使得
到的蛋白质保留它的全部或者大部分的天然(体内)性质。本章重点讲的
是现在通用的分离和纯化蛋白质的方法。
虽然蛋白质功能的研究通常只需要微量的蛋白质(通常少于lng或lp
m01),但是用于结构研究时则需要较大量的蛋白质,通常需要10 mg纯
蛋白质。总的来说,蛋白质的纯度和产量经常使实验者很矛盾。然而许
多蛋白质结构被成功解析证明了现在在蛋白质生物化学研究领域分离和
纯化蛋白质技术的提高。其中许多方法是从简单的、比较粗糙的实验方
案发展到复杂的、电脑控制的强大的程序。这些快速的发展又得益于生
物信息学和数学科学的共同发展。
蛋白质的分离与特性描述
现在有两种主要的方法来分离蛋白质。通常直接从机体获得所需的
细胞或组织,或者用分子生物学的方法在宿主(如大肠杆菌)中表达所需
的蛋白质。现在通过分子生物学手段把编码所需蛋白质的DNA插入到载
体中使蛋白质在大肠杆菌中更高效的表达是更为通用的方法。
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