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本文标题："高效液相层析-液固层析和液层析实验"
新闻来源：未知 发布时间：2016-10-2 13:51:09 本站主页地址：http://www.jiance17.com
高效液相层析-液固层析和液层析实验
混合性凝胶是由上述凝胶按不同比例混合而成，这类凝胶的颗粒及
孔径比较均一、机械性能好、耐高压、流速快且分辨率高。
凝胶层析法设备简单、操作方便，故早已被用于同工酶的分离，但
由于大多数同工酶的相对分子质量均很接近，故凝胶层析法主要用于分
离同工酶的高分子聚合物或同工酶与免疫球蛋白的复合物。
(三)亲和层析法 是利用配基和大分子之间专一性亲和力而设计的
一类层析分离方法。将相应的配基(如底物、辅酶、抗体)与某种适宜的
不溶性大分子基质(常用琼脂糖凝胶或聚丙烯酰胺凝胶)共价地结合，将
样品加到浸泡于缓冲液中的不溶性基质柱上，其中某些同工酶被选择性
地留在柱上，其他型别被洗脱。然后用不同pH和不同离子强度的含有底
物的溶液将吸附于柱上的同工酶洗脱收集，并测其活性，此谓亲和层析
法。此法过程简单、迅速、特异性高、分离效率强，适于分离和提纯同
工酶。
(四)高效液相层析法 又称高效液相色谱法、高压或高速液相色谱
法，是在经典柱层析的基础上发展而来的，具有高效、高速、高灵敏度
和自动化等优点。按固定相聚集状态可分为液固层析和液液层析两大类
；按分离机制不同可分为吸附、分配、离子交换凝胶和亲和层析等类型
。在凝胶渗透色谱分析中，大分子的同工酶被排阻无法进入填料孔，最
先洗脱；小分子的同工酶可渗入填料孔，洗脱滞后。整个过程是在流动
相和填料孔内的固定相液体之间进行溶质分子分配的过程。在离子交换
色谱中的固定相是带电的交换基团，该基团与酶蛋白分子的离子基团相
互交换，根据不同离子基团的交换特性之差异及相互作用不同，将同工
酶分离。
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