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可溶性抗原与相应抗体结合,在有适量电解质存在的条件下,形成
肉眼可见的沉淀物,称为沉淀反应。根据抗原与抗体反应的环境条件及
附加因素,沉淀反应可以分为环状沉淀、絮状沉淀和凝胶中的沉淀反应
三种基本类型。
在凝胶中的沉淀反应,可根据抗原与抗体反应的方式和特性分为琼
脂扩散、免疫电泳、对流免疫电泳(亦称反向免疫电泳或免疫电渗电泳)
和火箭免疫电泳等。现介绍双向琼脂扩散实验。
[目的]初步掌握双向琼脂扩散实验的基本原理、方法、结果、分析
及临床用途。
[材料]甲胎蛋白阳性血清(或脐带血),甲胎蛋白免疫血清,优质琼
脂粉,1%叠氮钠,吸管,载玻片,金属打孔器(外径3mm),微量滴管。
[方法]
1。用生理盐水,制成2%琼脂凝胶(加叠氮钠至最后浓度为0.1%
,防腐)。 .
2.制备琼脂板取洁净载玻片置平台上,用吸管缓慢加溶化冷却至5
0~60℃琼脂于玻片上,每片约3.5ml,滴加时勿溢出玻片边缘,并避
免产生气泡,冷却即成。
3.打孔用打孔器打呈三角形排列的三个孔,孔间距离为3ram。孔
底补以少量琼脂。
4.加样在其中一孔滴加甲胎蛋白免疫血清,另二孔分别滴加不稀
释及1:2稀释之甲胎蛋白。
5.温育加好样品的琼脂板置湿盒内,于37%温箱中静置24小时,
观察抗原抗体产生的白色沉淀线。
[结果]如与待检标本产生沉淀线,该线与阳性对照所产生的沉淀线
吻接成一线则表示阳性。如无沉淀线,或与阳性对照沉淀交叉,则表示
阴性。
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