---
---
---(点击查看产品报价)
本文标题："细菌质粒的制备和分析实验细菌质粒"
新闻来源：未知 发布时间：2016-8-29 0:20:16 本站主页地址：http://www.jiance17.com
细菌质粒的制备和分析实验细菌质粒
细菌质粒的制备和分析实验细菌质粒的制备和分析
质粒是存在于染色体外的能独立复制的共价闭合环状双链DNA
分子，它广泛存在于细菌等原核生物中，能够给宿主细胞提供一些
表型，如抗药性、分解复杂有机物的能力等。天然质粒经过改造后
可以作为基因工程的载体，这种质粒载体在基因工程中具有极广泛
的应用价值。因此质粒的分离与提取是分子生物学最常用、最基本
的实验技术之一。
细菌质粒是最常用的基因工程载体，它的提取可以分为以下三
步：细菌的培养、菌体的收集和裂解、质粒DNA的纯化。细菌的培
养通常在选择性的液体培养基中(如含某种适当浓度的抗生素)接种
一种含有质粒的宿主菌，37℃、150～250r／min摇培过夜获得。对
于某些松弛型复制的质粒，可以在细菌生长的对数后期加入适量氯
霉素抑制宿主菌染色体DNA的复制和蛋白质合成来增加质粒拷贝数
。但目前所用的质粒载体，如pUC系列，采用强的改进型pMBl复制
子，拷贝数能达到几百个，因此不用进行后期的氯霉素处理即可获
得高产量的质粒。细菌的收集可以采用离心的方法，为了防止细菌
的代谢产物影响质粒的纯度可以用液体培养基或生理盐水漂洗细菌
沉淀1～2次。细胞裂解的方法很多，如去污剂法、煮沸法、碱变性
法等。这些方法各有利弊，要根据质粒的性质、宿主菌的特性及后
续的纯化方法等多种因素加以选择。为了满足一些实验的要求，粗
提的质粒还需要进一步纯化，用氯化铯一溴化乙锭密度梯度超速离
心纯化质粒DNA是经典的方法。
所有资料用于交流学习之用，如有版权问题请联系，禁止复制,转载注明地址
上海光学仪器一厂-专业显微镜制造商 提供最合理的显微镜价格
合作站点：http://www.sgaaa.com/显微镜百科