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荧光漂白
光漂白(也称为褪色)是在光照条件下使其发生化学反应或结构改变
,从而失去发荧光的特性,就是所谓的漂白。它常用于生物体内扩散速
率常数的测定。由单重激发态跃迁到三重激发态,荧光团会和另外的分
子反应产生不可逆的共价修正。简而言之,荧光漂白是荧光团的光化学
破坏。在荧光漂白之前,某一特定荧光团的激发和辐射周期的平均数值
取决于分子结构及所处环境。一些荧光团漂白很快,只需释放一些光子
,然而对于其他的,在漂白之前需要经历成千上万次周期。
每一个荧光团都有不同的光漂白特性。对于激光共焦荧光
显微镜来
讲,光漂白是最大的问题,因此实际测试中需要考虑避免或减轻光漂白
程度。因此在激光共焦荧光显微镜测试中,需要选取合适的染料,该染
料可以在正常激光强度照射下最大程度减轻光漂白程度。当具有光漂白
的染料用于测试中,以下三种方法可以降低光漂白程度:尽可能用低的
激光强度;尽可能降低照射的时间(实际测试中,尽快完成一次测试);
采用自由基清除体。
多数的光漂白可以归结于自由基。采用自由基清除体则能降低光漂
白的速率。常用自由基清除体包括五倍子酸丙烷、对苯二胺以及三乙烯
二胺(DABCO)。
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