---
---
---
(点击查看产品报价)
裂解组织和细胞的方法
裂解细胞最常用的方法是物理的方法。裂解大部分动物
细胞所用的力比较温和,而裂解植物和细菌的细胞则可能需
要很大的力,因为在这些有机体中存在着细胞壁,使细胞的裂
解更为困难。物理的方法可以按照是由细胞和固体之间的切
变力产生裂解(固体切变法),或是在细胞悬浮液中由液体切
变而产生裂解(液体切变法)来分类。
固体切变法:现代的固体切变法是在用砂子或磨蚀
剂在研钵和研杵之间研磨的方法基础上发展而来的。这些方
法现在禾常用于裂解动物细胞,因为可以有一些别的较温和
的方法,但是它们被用于植物和细菌细胞的工作。通常,磨蚀
剂颗粒必须和细胞的大小相等,并且在研磨时必须保持其棱
角,但有一个缺点,在操作过程中可能会损伤较大的细胞器
(例如叶绿体)。
其他方法:在裂解细胞中已经使用的其他方法包括
细胞经渗透冲击而破裂;用酶消化细胞壁例如从蜗牛中得到
的复合酶制礼它含有纤维素酶、壳糖酶和脂酶;以及使用溶
菌酶。细胞交替的冰冻和融化;自溶作用;以及使用乙酸乙酯
或甲苯一类的有机溶剂也已成功地用于某些细胞类型。
从上述各种使细胞裂解所用的技术中,很明显的是大部
分方法都产生热。由于温度上升使大部分酶变性,因此必须
使所有的细胞裂解和细胞器分离的操作过程在低温下进行。
在O℃左右的冷室中工作;通过周围的冰来冷却细胞悬浮液;
使用冷的悬浮介质和容器一般都可以做到这一点。但是,必
须注意,有少数酶对冷是不稳定的,在冷却时可能会丧失它们
的活性。
不同的生物组织在匀浆时会出现特殊的问题,这主要通
过反复的试验来解决。为了得到适当的重复性,必须小心地
注意各种因素,例如温度、裂解的时间、速度和压力的变化。理
想的匀浆是能使它十分顺利地进行以后的分级分离,或正如
已被公认的:“匀浆的好坏要在分级分离中来验证”。
所有资料用于交流学习之用,如有版权问题请联系,禁止复制,转载注明地址
上海光学仪器一厂-专业显微镜制造商 提供最合理的
显微镜价格