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再吸收
如果荧光发色团的吸收光谱和发射光谱发生了重叠,则荧
光发色团可能本身出现荧光再吸收,吸收增加的时候,再吸
收影响荧光光谱的面积会越来越大,那时候同,对应于重叠
带的发射强度将逐渐减弱,出现的发射光谱便会改。
利用地激发和发射曲线不重的波长范围内测量荧光便可以
抵消吸收,这可以用有长波长截止值的阻挡滤波器来完成,
例如,测量常规副薇苯胺-福尔根反应的荧光时,用截止值
630nm的阻挡滤波器可以在受再吸收干涉的波长范围以外测
量荧光,遗憾的是,许多光电倍增管在绿-红波长范围内的
光谱灵敏度不均一,而许多重要的荧光发色团的主发射恰恰
在琮一范围内,在这种情况下,探测光谱中不受再吸收影响
的成分的效率较低,而且再吸收的光代表了较大比例的发射
光。
荧光强度和荧光生色团浓度间的关系
有人已证明测微荧光术原则上有可能不用微显像测密术的
扫描技术就得到直接测量,然而,这只有在假定样品内不同
部分的FRP对总荧光的贡献是和它们的浓度成定量比的情况
下地得如此。
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