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生物成像领域另一个重要的发展是把近场和远场集成在一起以增加成像的
动态范围。在同一个设备的内部进行近场和远场之间的切换,即可以获得高分
辨力小区域扫描,也可以获得大区域远场图像。一些组合了近场
显微镜和共聚
焦显微镜的商用设备已经在市场上出售了。
荧光寿命成像显微术,通常略写成FI.1M,能够提供细胞内或者组织的荧光
寿命的空间分布(Tadrous, 2000; Bastiaens&匆uire, 1999).利用荧光剂的荧
光寿命作为增强对比的机制,相对稳态荧光显微术来说有很多优势。首先,荧光
寿命对荧光剂的局部环境高度敏感。这种成像形式所达到的分辨力为研究生命
系统动态活动提供了可胎。对于上面讲到的FRET成像,FLIM有一个优势:由
于供体能量转移到受体上去了,因此只需要测量供体的荧光寿命,就可以测里其
能量转移。FLIM还有一个优势,就是它不受荧光强度、浓度的影响,并且最大
程度上与荧光剂的光致漂白无关。而且,尽管某些荧光团的荧光谱相似,但在不
同的环境下其寿命不同,因此寿命是更加敏感的环境测试量。FLIM已经被用
在多种不同类型的单光子和双光子激发成像装置上,包括多光子标记成像、离子
浓度数量成像、含氧数最成像和FRET的能最转移效率测量(Periasamy等,
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