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由于没有最优化光学及有效的检测器,传统的荧光
显微镜是一个非常紧密的光路安
排((light budget)。为了使一部分光子到达眼睛或胶片,这些显微镜需要使尽可能多的光
子通过显微镜。由于只使用一种荧光染料,因此可以用一个短通激发光滤光器以使得所
有比某一靶波长短的波长的光都能通过。这一波长通常是最大激发光波长和最大发射光
波长的中间波长。将一个二色光束分裂器以45度角放置,以便将水银弧灯的短波长光
反射至物镜,物镜再将光聚集到标本。发射出的荧光通过物镜收集,由于是长波长的光
故能穿过光束分裂器,再通过一个长通发射光滤光器到达检测器,常常是观察者的眼
睛。二色光束分裂器原则上能单独使用,然而实际上却不行,因为从盖玻片反射来的激
发光并不是完全由光束分裂器反射。激发和发射光滤光器可供多数波长选择;光束分裂
器则将光反射至标本或透射到检测器。多探针实验时,需要用一个更狭
细的带通滤光器代替短通激发滤光器;同时以带通发射滤光器代替长通发射滤光器。
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