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在植物体上做免疫定位的技术
免疫电子
显微镜定位技术与免疫荧光定位技术的原理和操作步骤基
本上是一样的。但由于荧光标记在透射电子显微镜下是看不到的(有关
免疫扫描电镜技术见第五章),因此在做免疫电子显微镜定位时,必须
应用在电子显微镜下能被看到的标记。现时用来做免疫电子显微镜定位
的标记,用得最多的是铁蛋白(ferritin),其次是金胶体(colloidal
gold),血蓝蛋白(haemocyanin )、病毒等。
在植物体上无论是做荧光或电子显微镜免疫定位基本上都采用以下
两种方法:
1.在包埋之前进行定位和
2.在包埋之后进行定位。
第一个方法是先将细胞或原生质体或组织放在标记了的抗体溶液内
处理,然后再做包埋和切片。而第二个方法则是先将材料包埋,然后再
在切片上进行免疫定位。第一个方法的缺点是标记抗体不易渗入细胞内,
因此容易造成假定位或负定位。但假如用后一种方法则不会出现这一个
问题,因为在切片时细胞受到损伤,这使标记抗体能轻易地进入细胞内。
故此在一般的情况下,用后一种方法来做免疫定位是比较好的。
姑勿论是先定位后包埋,抑或先包埋后定位,总之材料必定得被切
成片,然后才能在光显微镜或电子显微镜下观察。
现今用来制备切片的方法很多。从前大多数工作者都用冰冻或石蜡
切片,但现今则有转用塑料薄切片的趋势
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