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本文标题："用于观察某动物囊胚期细胞用专业光学显微镜"
新闻来源：未知 发布时间：2013-10-28 14:39:58 本站主页地址：http://www.jiance17.com
用于观察某动物囊胚期细胞用专业光学显微镜
囊胚期胚胎显微注射
仪器
显微注射操作台
材料
1. 怀孕 3.5 天母鼠
2. 37℃、5% CO2 恒温培养箱
3. 胚胎干细胞培养液（ES培养液）
4. ES 细胞
5. PBS、Trypsin/EDTA、矿物油
6. 嘴吹式胚胎传送毛细玻璃管、显微注射针及显微胚胎固定针
7. 凹槽之载玻片
8. IM
实验步骤
1. 由怀孕 3.5 天母鼠子宫收集囊胚（方法见 以mitomycin C 处理纤维母细胞）
2. 将受精卵以口吹式毛细管放入含 ES 细胞培养液中，并覆盖矿物油避免蒸发，
再放入 37 ℃、5% CO2 培养箱中备用。
3. 于进行显微注射前约 1~2 小时，準备 ES 细胞。
4. 取 ES 细胞液一滴，滴于凹槽载玻片中央，并覆盖矿物油，避免蒸发。
5. 以毛细管吸取胚胎至玻片上 ES 细胞液中（一次约取 10 颗左右胚胎即可）。
6. 于显微注射操作台之高倍视野（400X）下，
以显微注射针仔细吸取饱满光亮之 ES 细胞约10~15颗。
7. 另以显微胚胎固定针吸附一颗囊胚。
8. 在高倍视野下，将显微注射针尖和被吸附之胚胎调整一致焦距，且肉眼可清晰观察。
9. 小心将显微注射针穿刺入囊胚空腔中，须注意不可由含内在细胞层（ICM, inner cell mass）
之一侧穿刺，且穿刺时尽量避免伤害滋养外胚层细胞。
10. 转动油压注射器，将 ES 细胞注入。
11. 抽出注射针，并释放完成注射之囊胚。
12. 重覆步骤 6，继续进行下一颗囊胚之注射
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