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囊胚期胚胎分离
仪器
解剖显微镜附外接或内接光源
材料
1. 受精 3.5 天之母鼠
2. 解剖器具一套(包含大剪刀、小剪刀、小号镊子、铁夹)
3. B35
4. M2 及 M16 培养液(Sigma)
5. 口吹式毛细管
6. 解剖显微镜
7.矿物油
实验步骤
1. 在 B35 中滴入数滴 M16 培养液,并以矿物油覆盖,如图示。
2. 将 B35 培养皿放入 37℃、CO2 培养箱预温待用。
3. 再取两个 B35,皆放入适量 M2。
4. 将受精之母鼠断颈,腹部朝上放置。
5. 以 70% 酒精擦拭消毒。
6. 以解剖剪刀将母鼠外皮剪开至胸部,接着剪开母鼠皮下肌肉层,至内脏清处可见。
7. 移开内脏,找出位于母鼠背部两侧子宫。以器具清除周围组织。
8. 剪取输卵管和子宫交界处至阴道口之部份,置于含 M2 的 B35 中。
9. 以 1 ml 针筒吸取 M2,自子宫口插入针头以冲洗分离出的子宫,平均一条子宫冲洗 0.5 ml 的 M2。
10. 将冲出之囊胚于显微镜下观察,可见被冲出之囊胚。
11. 以口吹式毛细管将囊胚吸至含 M16 的 B35 中,置 37℃ 培养,等待显微注射
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