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显微注射
1.取一完成的 microinjection pad,在上面呵气,迅速滴上一滴Halocarbon oil 700。
2.重复三、(二)的 7.,利用挑虫用针前端的睫毛轻轻滑过线虫皮肤,
使其滚动到其腹部朝上,可以看到白色条状物。
3.可重复数次,将数只虫固定在 microinjection pad 上并调整好其位置以方便后续的注射。
4.将玻片放到倒立式显微镜的载物台上,使用低倍率并调整线虫的焦距,将要注射的虫移到视野的中央
5.利用粗调节轮调整针的上下位置,使针头下降到油中。
6. 为确保其针管流通,轻压与握针器连接之针筒,观察是否有液体流出。
7.转成较高倍率,调整针使之与虫位于
同一平面。可用针头轻轻碰虫观察前端使否可碰触到线虫的最外层体壁。
8.将针轻压滑过虫的腹部,待针插入卵巢后微微抽出,缓慢地压针筒,
使针里面的液体流入卵巢。等到虫的卵巢有明显胀大即停止压针筒并
小心地抽出针。
9.将针微微上移,转回低倍率的视野。
10. 调整线虫的焦距,将其他要注射的虫移到视野的中央。
11.重复 6.~8.将含有要放入的 DNA 液体注入要注射的虫。
12.用粗调节轮将针往上移离玻片,将玻片移开倒立式显微镜。
13.取另一玻片在上面滴上一滴油,放
到倒立式显微镜的载物台上,利用粗
调节轮小心地调整针的上下位置,使
针的前端微微下降到油滴中即可,避免碰到玻片的底部
11.在有注射完成的线虫之玻片上滴上 PBS,
在显微镜下观察线虫是否有离开 microinjection pad 并游动。
12.将线虫挑起放入 24 well 中的其中一个 well 并标示,待其产卵、孵化(约需 2~3 日),
并注意其复原状况
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