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设备
离心机、分光光度计、显微操作系统、micro forge、加热器(heater)、micropipette puller
制作基本工具
(一)制作挑虫用针
1.取一支制作挑虫用针的玻璃管,将前
端较细的部分放在酒精灯上加热,待
玻璃融化后拉长。
2.在适当粗细的地方截断玻璃管,并剪下一根假睫毛。
3.将玻璃管前端沾三秒胶,在显微镜下用镊子将睫毛插入管中,并用剪
刀将前端太长的部分剪掉。
4.用另一支玻璃管粗端的边缘轻压睫毛,使睫毛前端成铲状。
5.将睫毛沾一些三秒胶并待干,使前端较为光滑。
6.将针的前端泡在漂白水中约 30 秒,接着泡 70%酒精约 30 秒
(二)制作 24 well agar1.配置 agar 溶液,灭菌。
2.放在一旁冷却至约 55℃,加入 CaCl2 100g/100ml、MgSO4
100g/100ml、K.phosphate 2.5ml/100ml。
3.在无菌操作台下每个 well 上放入 1.5ml agar,静置平放约半小时。
4.待其较为干燥后,每个 well 中滴上一滴菌液,等 agar 将菌液吸入。
5.将完成的 24 well 倒放在一旁,在细菌有明显繁殖后放入冰箱备用。
三、制作显微注射用工具
(一)制作显微注射用的针
1.找 micropipette puller 上空白的program,有。调整四个参数(Heat、
Pull、Velocity、Time)以制做出适合注射线虫的针
2 调整 micro forge 上玻璃球的位置并
将针调整到视野底下,调整玻璃球
位置使针的方向正好与球面垂直,
用玻璃球把针前端过细或过软的地
方撞碎。
3.制作数支针以备用
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