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本文标题："电荷耦合元件(CCD)搭配显微镜实时观察微观结构"
新闻来源：未知 发布时间：2013-5-9 1:13:47 本站主页地址：http://www.jiance17.com
主要是关于建立一套稜镜式全反射显微荧光显微术系统，以进行单分子研究。全反射显微术成功的关键，
在于有效地降低背景荧光值。全反射在界面所建立的渐逝场，其强度为入射光能量的数倍，并随离界面的距离增加而呈指数性衰减，
其渗透深度颇为狭窄，仅侷限于界面附近0.1微米的带状区域，故能选择性激发临近界面的荧光分子。
渐逝场中的荧光标记分子经激发所放出的荧光讯号，经高数值孔径的物镜收集后，
分别以电荷耦合元件（CCD）及雪崩式光二极体（APD）侦测。电荷耦合元件的优点在于空间的解析与多个单分子资讯的同时撷取，
雪崩式光二极体的优点在于时间解析度，可用于单频道或双频道的光子计数，以进行时间系列的解析。
针对ATP合成酶，本实验选择CyDye作为荧光标记分子，包括Cy3及Cy5，并采用532nm绿光雷射作为Cy3的激发光源。
将浓度在10~100pM等级的CyDye洋菜溶液，旋镀制成含水达99%的洋菜胶体薄膜以进行系统测试。测试的结果，无论是CCD影像分析，
或是APD光子计数量测，均显示本实验所建立的稜镜式全反射显微荧光显微术系统，确实具有进行单分子研究的能力，
其中最主要的证据系Cy3单分子单一步骤光淬灭的行为。本实验的背景荧光值仅每秒约20个单光子，讯号背景比值平均在13左右，
最高达20，且咸信仍有提升空间。在本实验系统的观测下，Cy3荧光单分子在发生光淬灭之前，约可产生100,000～1,000,000个光电子讯号。
单分子实验系统确立后，未来将可以生物马达为主角，进行单分子动态行为分析与动力学研究，包括以Cy3配合Cy3，
进行荧光共振能量传递（Fluorescence Resonance Energy Transfer）之实验，以期透过化学观点，探讨生物马达的工作。
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