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单分子侦测因可呈现动态行为与动力参数的真实波动与分布、可进行蛋白质反应事件操纵与反应之定量分析、
且反应毋须同步,故为生物分子研究之重要且实用的方法。而所谓单分子荧光显微术,
乃是利用适当波长的激光,激发所选择的荧光标识分子,透过对荧光标识分子的侦测与观测,追踪目标分子的动态行为。
主要是关于建立一套稜镜式全反射显微荧光显微术系统,以进行单分子研究。全反射显微术成功的关键,
在于有效地降低背景荧光值。
全反射在界面所建立的渐逝场,其强度为入射光能量的数倍,并随离界面的距离增加而呈指数性衰减,
其渗透深度颇为狭窄,仅侷限于界面附近0.1微米的带状区域,故能选择性激发临近界面的荧光分子。
渐逝场中的荧光标记分子经激发所放出的荧光讯号,经高数值孔径的物镜收集后,
分别以电荷耦合元件(CCD)及雪崩式光二极体(APD)侦测。电荷耦合元件的优点在于空间的解析与多个单分子资讯的同时撷取,
雪崩式光二极体的优点在于时间解析度,可用于单频道或双频道的光子计数,以进行时间系列的解析。
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