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荧光的发光过程可以分为三个阶段,可用电子能阶简图-Jablonski
diagram 來作說明。第一阶段(对应图上的 1)是在基态 S0 的荧光分子吸收了由激
发光源提供带有 hνEX 能量的光子而是分子到达较高的 excited electronic singlet
state (单重激发态) S1 ,其中激发光选择的波长必须要涵盖荧光分子最大的吸收波长。
第二阶段(对应图上的 2),跃迁到高能态 S1 的荧光分子会发生结构上的变化或是
和週遭环境产生交互作用,这将造成部分能量损耗而进入较低的能态 S1 。这个
阶段是荧光发生的起源
第三阶段(对应图上的 3)处在 S1 的荧光分子以光的型式释放能量回到基态 S0 ,
因为在第二阶段有能量损失,所以释放出來的光子能量较低且光的波长较长。当
中激发光光子与荧光光子的能量差(hνEX –hνEM)称之为 Stokes shift。因此我们
可靠着 Stokes shift 的特性,利用兩种光的不同波长配合适当的濾片來分離出需要的荧光讯号
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