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猪胚显微操作技术-一般选择立体
显微镜(10~20倍)即可
体细胞保存及複制技术:
一般而言,整个体细胞复育流程可分为体细胞保种、体细胞核转置及亲缘鑑定。欲保种之种猪,
可取其耳刻组织,置于碎冰中快地寄送到保种之实验室,经由无菌操作,将组织建立成初代培养之细胞,
所建立之细胞可简易置于含10%DMSO之胎牛血清冷冻保护液中,置于-80℃冰箱过夜,再移至液态氮中冷冻保存,
此保种方法不仅简易,且不限于种公猪,对具优良繁殖性能之母猪亦可行。在体细胞核转置(SCNT)方面,取体内或体外成熟卵母细胞,
藉由显微操作技术进行卵母细胞核去除,再将供核细胞直接注射至细胞质中,
可得重组猪胚:目前发展中之徒手法(hand made)在一般解剖显微镜(10~20倍)下,以徒手持刀片将猪卵对半截切,再取无极体(无卵细胞核)两半对夹一颗体细胞进行融合,
取得重组猪胚;再将此等重组猪胚胚移置受胚母猪输卵管或子宫角上端内,
待母猪完成怀孕,进行SPF剖产或自然分娩複制猪只。在亲缘鑑定方面,将体细胞与複制分身之基因体DNA,
进行单核苷酸多态型与微卫星标记之基因型分析,即可确定与其亲缘之正确性。
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