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生物体或矿物本身具有自发荧光特点较少-
荧光显微镜常识
最大的限制就是必须要用萤光分子。然而自然界的材料,
不论是生物体或矿物,具有自发萤光特性的分子仍属少数,大部分均需要外加染剂以标定目标分子。
另外要找到适合的萤光分子也很不容易。首先是萤光分子本身需要有适当的能阶分佈或是特殊的化学结构变化,
能够靠外加光场造成萤光效应的抑制。而且这些萤光分子还最好要能很快的从被抑制的状态中恢复
,才能继续进行下一个点的扫瞄。如果一旦一群萤光分子被抑制后得花上一秒才能恢复,
那么扫瞄一张 256 × 256 的影像就要耗费将近一天的时间,
不太实际。其次是针对想观察的生物化学反应,不见得都能找到适合的萤光分子做标定。虽说如此,
只要有适当的萤光标定分子,STED 也能做到每秒超过 28 张影像的即时观测[2],
让研究者们对活体细胞中奈米尺度的生物化学现象有更直接的观察
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