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本文标题："细胞透明且带有光泽但不是圆形呈不规则形状"
新闻来源：未知 发布时间：2012-11-18 2:46:23 本站主页地址：http://www.jiance17.com
我目前所做的实验叫做''phagocytosis assay''
首先取出腹腔与骨髓细胞，lyse掉红血球细胞，在以1xPBS
wash，最后回溶于1 ml 1xPBS，取10 ul细胞+10 ul 0.4% trypan blue混均匀后，取10 ul滴于血球计数器去计算活细胞，我主要是要算macrophage和neutrophil，染了trypan blue后，在显微镜下以10x去算活细胞。本来实验室都是直接取10 ul滴于血球计数器去计算活细胞，但是我算出来的细胞都比别人少很多，所以后来改用染trypan blue去计算，不过算出来还是比别人少。为什么呢?
我目前有几个问题
1.细胞 染trypan blue后 ，活细胞呈现透明带有光泽且为圆形，对吗?
2. 但是有些细胞虽然为透明且带有光泽，但不是圆形，呈不规则形状，请问这样的细胞是快死了还是被刺激所以呈现要吞噬的形状(我用的tip和1xPBS都是灭菌的)，请问这样的细胞算活细胞吗?
3. 有些细胞虽然为透明且带有光泽，但是比要算的细胞小一号有的更小，这是活细胞吗还是气泡?
有的比要算的大，是活细胞吗?
用cytometer数细胞时有几点要注意不知道你有没有做到？
chamber边界问题、细胞液的稀释倍率、换算原细胞液的公式
还有你是否有先把细胞打散成单一细胞，而不是有些细胞还聚在一团
染trypan blue后活细胞是发光透明状，因活细胞细胞膜没有破裂，染剂进不去细胞，自然就染不到了
你的实验步骤中提到用1x PBS回溶，是否有注意在最短时间内loading细胞液至chamber内呢，说不定是因为实验手法影响到细胞
做实验有时也需要经验，多试几次，如果还是一样，可以考虑在别人进行实验时在一旁观摩，或者请实验室的其他人带者你一起做，一起找出错误
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