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本文标题："光学显微观察细胞黏菌各时期的形态特征"
新闻来源：未知 发布时间：2012-11-13 23:07:18 本站主页地址：http://www.jiance17.com
研究过程与方法：
1.采集地采集土壤，将采集土壤制成悬浮液静至约十分钟。
2.将表层的悬浮液滴在已种有大肠杆菌的乳糖酵母抽出物培养基 (Lactose Yeast-Extract Agar)，此步骤需在无菌操作台。
3.培养基放至于25℃恒温培养箱中，三天后观察是否有细胞黏菌的孢子囊体或伪原生质体出现，若有发现则转移至新的培养基上培养。
4.更换采集地点重複以上步骤。
5.定时观察恒温培养箱中的培养基，以了解细胞黏菌的生活史。
6.定时将已长出的细胞黏菌作转移。
7.以解剖和光学显微观察细胞黏菌各时期的形态特征，及孢子之形状大小、极粒有无，孢子囊柄顶端和基部宽度。
8.抽取其孢子进行DNA萃取及定序工作，比较亲缘关系。
9.根据参考文献、序列辅助和专家指导来进行菌种鑑定
一、采样
〈一〉準备采集所需用具、铲子、笔、密封袋、相机
〈二〉找寻腐植质丰富的土壤，且须在树荫下阴凉处
〈三〉将落叶拨开，每个样区约1~3包(腐植质较丰富者挖较多)
〈四〉注明采样地点、人、时间
〈五〉若未立刻进行下一步实验，需将采样的土先冷藏
〈六〉采样时，选择天气良好的日子，且落叶多的腐植土
二、培养基的调配
本实验采用乳糖酵母抽出物培养基（Lactose Yeast-Extract Agar）（Norberg,1971）
〈1〉 以烧杯取1L的水，分别以电子秤秤出酵母萃取液【Yeast Extract】0.5g、乳糖1g，
加入烧杯中以小勺子搅拌。
〈二〉将1L的溶液分装至準备好的五个锥形瓶中，每瓶约200ml
〈三〉将洋菜【Agar】剪成小块，每小瓶秤3g加入，以刮杓拌匀，将剩馀的agar碎块装入密封的罐子内。
〈四〉以锡箔纸将瓶口密封，放入高温高压灭菌器内进行灭菌。(121℃ 20min)
〈五〉约1hr后将锥形瓶取出，移至无菌操作台，倒入培养皿。
〈七〉经过一段时间冷却凝固后，以PARAFILM密封培养基，并装袋放入恒温箱
三、细胞黏菌的分离
〈一〉準备10数个小烧杯装入50ml的蒸馏水，以刮勺将样土挖出，每杯约5g的样土
（二）静置等待约10分钟，至土皆沉淀，使其悬浮于液面
（三）至无菌操作台，将培养基打开
（四）将烧杯上层的液体，以玻璃滴管吸出，滴于培养基上，每个烧杯滴两个培养基
（五）滴完后，注明人、时间、及样土代号，将培养基密封，并放回恒温箱中
（六）数天后，将培养基以解剖显微镜观察，寻找是否有细胞黏菌，有的话便进行转移
四、细胞黏菌的转移
〈一〉在无菌操作台中，以解剖显微镜观察细胞黏菌
〈二〉将针筒烧至红热之后置入绝对酒精中冷却，迅速的在酒精灯上过火使酒精蒸发
〈三〉将培养皿中生长的细胞黏菌子实体整株或孢子囊堆，以灭菌后的解剖针挑起，转植于新鲜的培养基
〈四〉以PARAFILM封口，再置于25℃的恒温培养箱中培养
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