---
---
---(点击查看产品报价)
本文标题："实验步骤-免疫细胞化学染色法之单一染色"
新闻来源：未知 发布时间：2012-11-12 16:47:18 本站主页地址：http://www.jiance17.com
实验步骤-免疫细胞化学染色法之单一染色
免疫细胞化学染色法 ( immunocytochemistry)
单一染色
利用单一免疫细胞化学染色法（immumocytochemical staining）可鉴定本实验
培养之混合神经胶质细胞的型态、种类及组成比例。以 anti-glial fibrillary acidic
protein（anti-GFAP）辨示星状胶质细胞（asatrocytes），由于星状胶质细胞含有丰
富的 glial fibrillary acidic protein 故被染上的星状胶质细胞，在显微镜下可看到一
丝一丝的 glial fibrillary acidic protein。而用于辨示微小胶质细胞（microglia）的有
anti-ED1、anti-OX6、anti-OX42；anti-ED1 可辨示微小胶细胞细胞质内的溶小体
（lysosome）一般而言，anti-ED1 可标示的是活化态的微小胶质细胞，但离体实
验（in vitro）对微小胶质细胞而言，就会稍微使得微小胶质细胞被活化但其活化
的程度与给 LPS 处理后相较仍有程度上之差异；从 anti-ED1 染色可看到给予 LPS
处理的微小胶质细胞其外形变得比较圆、几乎看不到突起的触角（process）而无
给予 LPS 处理的微小胶质细胞亦可被标示到，但显微镜下可看到其外形较细长、
仍可清楚看到突起的触角。anti-OX6 辨示活化状态之微小胶细胞细胞膜上 MHC
class II 的接受器。而 anti-OX42 可辨示微小胶质细胞细胞膜上 CR III 接受器，不
论微小胶质细胞是否被活化都可被 anti-OX42 标示到。当微小胶质细胞被活化
时，其型态会由静止状态（resting stage）变成活化状态（activated stage），即细胞
的外观会由不规则的、细长的外形且可看到突起的触角慢慢转变为外形较圆、突
起的触角逐渐缩短的型态，称为（amoeboid）
实验步骤
1. 将细胞种于置有玻片的 24 孔培养盘中，定期更换新鲜培养液至可实验状态。
药物处理后的细胞以 PBS（1X、pH＝7.4）清洗二次（10 分钟 / 次）后，加
入 4% paraformaldehyde 置于室温下二十分钟以固定细胞，之后移除
paraformaldehyde 再以 0.05M TBS（pH=7.6）清洗细胞。
2. 加入 3% H2O2 于 0.05M TBS，置室温下作用三十分钟以去除内生性过氧化酵素
（endogenous peroxidase）。
3. 以 0.05M TBS 清洗细胞三次，移除 H2O2，尽可能避免泡泡产生。
4. 去除非特异性的结合（nonspecific binding），将 10% normal horse serum（NHS）
或 normal goat serum（NGS）,0.1% Triton X-100 加至 0.05M TBS 混合后，加入
24 孔培养盘中使之足以覆盖表面，置室温下一小时。
5. 移除 NHS 或 NGS，以 0.05M TBS 清洗细胞三次后，加入初级抗体置于 4℃过
夜反应。
6. 移除初级抗体，以 0.05M TBS 清洗细胞三次后，加入次级抗体于室温下反应
一小时。
7. 移除次级抗体，以 0.05M TBS 清洗细胞三次后，加入 peroxidase-conjugated
streptavidin 于室温下反应三十分钟。
8. 移除 peroxidase-conjugated streptavidin，以 0.05M TBS 清洗细胞三次后，加入
DAB（5% DAB+1% H2O2）作呈色反应
9. 对比染色
所有资料用于交流学习之用，如有版权问题请联系，禁止复制,转载注明地址
上海光学仪器一厂-专业显微镜制造商 提供最合理的显微镜价格
合作站点：http://www.sgaaa.com/显微镜百科
下一篇：实验室专题-培养基的制备步骤