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细菌铁载体检测方法需要的设备和试剂!
设备
本方法中使用的各种器皿均应经灭菌处理。
(一)采样容器:无菌的硼矽玻璃或塑胶容器,亦可使用无菌袋。
(二)稀释瓶:能耐高温高压灭菌之有盖硼矽玻璃或塑胶制品,但不可以使用棉花塞当盖子。一般有 100 mL 刻度者。
(三)量筒:一般使用 10 mL、25 mL、50 mL 及 100 mL 之量筒。
(四)吸管:一般使用 1 mL、5 mL及 10 mL 之玻璃或无菌塑胶制品,应有 0.1 mL 之刻度。
(五)三角锥瓶:硼矽玻璃制品,100 mL、250 mL、500 mL或 1000 mL,可作为混合培养基的容器,且方便储存者。
(六)试管:大小约 150×15 mm 之试管或有盖螺旋试管。
(七)培养箱:温度能保持在 30±1℃ 者。
(八)高压灭菌釜:用于稀释液、培养基及不能乾热灭菌之材料、实验用具的灭菌。能以 121℃(约 15 lb/in2 或 1 kg/cm2)灭菌 15 分钟以上者。
(九)乾热灭菌器:用于玻璃器皿之灭菌。温度能保持在 160℃、2 小时或 170℃、1 小时以上者。
(十)
显微镜:一般光学显微镜,具有10、40、100 倍接物镜者。
(十一)pH计。
试剂
(一)培养基
1、Leptothrix2xPYG培养基
每一升 Leptothrix 2x PYG 培养基含有下列成分:
蛋白(Peptone)
0.5g
酵母抽出物(Yeast extract)
0.5g
葡萄糖(Glucose)
0.5g
硫酸镁(MgSO4‧7H2O)
0.6g
氯化钙(CaCl2‧2H2O)
0.07g
N-﹝2-Hydroxyethyl〕piperazine-N
3.57g
-﹝2-ethane sulfonicacid〕(HEPES)
硫酸锰(Manganese sulfatemono-hydrate)
17.0mg
蒸馏水
1.0L
将 PH 值调至 7.3,再经 121℃,15 分钟灭菌
(二)稀释液
1、磷酸二氢钾溶液
取 3.4 g 磷酸二氢钾溶于 50 mL 之蒸馏水中,俟完全溶解后,以 1.0 N 氢氧化钠溶液调整其 pH 值为 7.2±0.5。然后加蒸馏水至全量为 100 mL,储存于冰箱中作为原液备用。
2、氯化镁溶液
取 8.1 g 氯化镁(MgCl2˙6H2O),先溶于少量蒸馏水中,俟完全溶解后,加蒸馏水至全量为 100 mL,储存于冰箱中作为原液备用。 使用时分别取 1.25 mL 磷酸二氢钾溶液及 5.0 mL 氯化镁溶液混合,再加蒸馏水至全量为 1,000 mL,混摇均匀后,分装于稀释瓶中,经 121℃ 灭菌 15 分钟以上,作为稀释液备用。
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