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新闻来源：未知 发布时间：2012-5-21 14:19:11　本站主页地址：http://www.jiance17.com

环境荷尔蒙和环境激素简介！

建立以酵母菌的生物效应作为环境荷尔蒙中雌性激素的侦测指标。

本试验将以经过基因转殖的酵母菌PL3作为雌性效应的生物测试指标，以人造雌性荷尔蒙作为试验的参考物质，并以分光光度计与显微镜计数细做比较，细胞浓度过高均需经过稀释而后上机分析；显微镜计数费时，分光光度计于细胞浓度过低侦测不到，但较为迅速，

推估数目与显微镜推估值相当。以分光光度计分析选择波长600 nm可降低培养液的干扰。初始细胞浓度过高50000或100000 cell/well，若以96孔盘培养，因不易达混合效果，会造成细胞集结的现象，造成高估的结果。人造雌性激素雌二醇与乙基雌二醇对此酵母菌增生试验，以乙基雌二醇效果较雌二醇佳，生长速度较快。以乙基雌二醇做测试，50 ppn即可促进酵母菌PL3增生，反应相当灵敏。

许多人造的工业化学物质及农药可能干扰人类及野生生物体内分泌正常功能进而影响其生长、发育、行为及生殖。虽然农药及工业化学物质，在上市前已做过大部分的毒性测试，如对老鼠或兔子的半致死浓度(LD50)、对兔子皮肤接触毒性、对兔子眼睛毒性等等，但是传统的毒性测试不易检测出物质对生物内分泌系统的影响。故美国国会促其环保署增订内分泌测试方法，以利评估其对人类或生态的影响。

具有内分泌系统的生物很多，包括哺乳类、非哺乳类(如两栖、爬虫类及鱼类)及无脊椎动物(软体动物如蜗牛、节肢动物如龙虾、昆虫及其他种类)。内分泌系统包括内分泌腺体及其所产生的荷尔蒙，可以调节生物的生长、发育、行为及生殖。内分泌腺包括脑下垂体、甲状腺、副肾腺、卵巢及睪丸；荷尔蒙为内分泌腺体所分泌的生物化学物质，经血液运输至身体各部位，藉以调控标的器官或组织的生理功能。在五十多种已知的脊椎动物荷尔蒙中，雌性激素、雄性激素、甲状腺素，对生长、发育、行为及生殖等生理机能扮演重要角色。

干扰这个複杂的系统可经由许多不同途径。如有些化学物质会模拟天然的荷尔蒙，”愚弄”身体对此”假”刺激于不当的时机做过多的反应；另外有些化学物质可能阻碍组织或器官的荷尔蒙接受器与正常荷尔蒙键结；甚至有些化学物质直接与内分泌腺体作用，抑制或刺激产生荷尔蒙，直接或间接影响体内荷尔蒙的作用，导致生长迟缓、性别演化异常、繁殖能力降低、癌症肿瘤罹患率增加等，因有别于生物体内自然生成的荷尔蒙，简称环境荷尔蒙(environmental hormones )又名内分泌干扰物质(endocrine disruptors)。

化学物质种类繁多，市面流通竟达87000种以上，逐一进行测试将耗费大量资金、时间与试验生物的生命，美国环保署成立内分泌干扰物质筛选及测定方法谘询委员会(Endocrine Disruptor Screening and Testing Advisory Committee, EDSTAC)，针对环境中可能干扰内分泌干扰系统的化学物质，建立ㄧ完善的评估模式。这个委员会于1998年8月报告中提出分级或分层方式筛选及测试具内分泌干扰物质，其步骤包括刚开始的分类(Initial Sorting)、优先顺位的设定(Priority Setting)、第一阶段筛选(Tier One Screening)及第二阶段筛选(Tier Two Screening)。内分泌干扰物质筛选及测定方法谘询委员会一开始目标设定为化学物质对雌性激素、雄性激素及甲状腺素的影响，因为此三种荷尔蒙掌控主要的生殖、发育及生长等生理作用，尔后对此三种荷尔蒙研究所累积的资料，再推估其他荷尔蒙可能受到的影响。

其中第一类筛选(Tier One Screening)测试方法中又分为活体内(in vivo)与活体外(in vitro)生物测试，活体内生物试验有为期三天雌鼠体子宫增生试验(a rodent 3-day uterotrophic assay)、为期20天之青春期雌鼠甲状腺试验 (a rodent 20-day pubertal female assay with enhanced thyroid endpoints)、鼠体Hershberger分析试验(a rodent 5 to 7-day Hershberger assay)、青蛙成长过程期间之型态变化测试(a frog metamorphosis assay)、鱼性腺再现分析(a fish gonadal reproductive screening assay)；活体外生物试验有雌性激素受体键结效应及指标性基因测试(an estrogen receptor binding or reporter gene assay)、雄性激素受体键结效应及指标性基因测试(an androgen receptor binding or reporter gene assay)、睪丸剁碎匀浆培养之类固醇增生效应(a steroidogenesis assay with minced testis)。第二阶段的进阶试验则是将第一阶段检测完具有干扰效应的化学物质进一步以生物包括鸟类、鱼类、无脊椎、两栖类等生物进行检测。现今仍以第一阶段检测方式较常用，而活体外检测技术又较活体生物简单、快速、一致，实验室间资料又可互相比较，因此所研发的技术发展很快，包括细胞增生试验(cell proliferation assays)、重组质体/报告基因(recombinant receptor/reporter gene assays)、酵母菌分析(yeast-based)等。

酵母菌的特性及基因已完全被解读，培养简单、经济又方便，堪称为真核的大肠杆菌，可作为生物测试筛选的指标生物。本研究将已转殖指标基因之酵母菌进行有关环境荷尔蒙雌性激素生物效应的检测。