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细菌的观察与培养实验目的原理和步骤!活细菌观察用
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(一)目的
把实验用于日常生活中, 以不同来源的水质样品作材料,检测水中微生物的数目与种类,并由培养结果中观察各种细菌的菌落型态。由单一个细菌分裂,繁殖而形成的细菌族群称为菌落(colony),不同种类的细菌所形成的菌落形态也各不相同,其形态指标包括菌落的大小、颜色、气味、表面光滑或粗糙、边缘平整或呈锯齿状,是否有黏液。因此同学们可以从中了解表面的巨观判断与显微镜下的观察作一比较。
(二)原理
本实验主要是希望同学学习和熟悉生命科学实验中最基本的微生物操作技术与方法,了解灭菌、无菌操作、分离方法、纯系培养、染色鑑定与计数的方法。这些技术将是未来微生物学、分子生物学等等实验的基础。
(三)材料 / 设备 / 药品
Bacto-tryptone
Bacto yeast extract
NaCl
(四)步骤
1. 样品水洗以振盪混合器(vortex mixer)摇匀。
2. 以pipetman(微量吸管)吸取0.1ml的水滴在培养基上。
3. 浸在酒精中消毒的抹棒先滴掉大部分酒精,再以火焰烧去剩馀的酒精。
4. 抹棒放凉后,把培养基上的水液涂抹均匀。
5. 在培养皿底部标明组别及水的样品来源。
6. 培养皿的底部朝上,在32℃培养,隔日观察。观察项目包括培养皿上的菌落数与菌落形态。
7. 有兴趣的同学取不同菌落的细菌作成抹片后,染色观察。(方法如第一部分所述)
(五)注意事项
1. 微量吸管的旋转钮为调整体积之用, 因应实验需要调到100μl(即0.1ml)处,可由刻度窗上看到。其上方按钮是取放液体时使用,在吸取液体时先在外面压到第一段之后在伸入液体中取样,取样时的动作不可以过大,以免液体上喷后污染微量吸管。为将液体压出,必须将按钮压到第二段,才能把吸入的液体完全排出,第一段与第二段按钮的感觉可在操作前先行熟悉(旁边的按钮则为丢弃吸头之)。
2. 使用完后抹棒直接放入酒精杯中,不要经过火焰,以免引起杯中酒精燃烧。
3. 所有标注字体应写于底部(有培养基的那部分),以免因盖错盖子而得错误结果。
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