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疮痂病病原调查材料及方法
选取泰国种番石榴果园调查及记录疮痂病发病率,并采集罹疮痂病枝条、老叶携回实验室内,先以解剖
显微镜观察有无PestalotiapsidiiPat.分生孢子盘,再以光学显微镜检查其分生孢子。将该菌以单孢分离法分离、培养于PDA经10日后,选取PP-1(新营果实分离)、PPT-1(新营枝条分离)、PPL-1(新营叶片分离)菌株参试,试验时将孢子配制成106/ml悬浮液,喷雾接种于泰国种番石榴果实及嫩梢后套袋保湿,对照组喷以无菌水,每处理4重複;放置25℃定温箱并逐日调查是否发病。
温度与病原菌孢子发芽、菌丝生长及产孢量关系
为明瞭病原菌孢子于不同温度的发芽情形,在2%Wateragar上滴入0.1mlPP-1菌株之106/ml浓度孢子悬浮液参试,在25℃定温箱中,每隔1小时取出4个培养皿,滴入棉蓝染液后,每皿逢机调查200个孢子发芽情形,以瞭解孢子发芽所需时间。另在5-35℃每隔5℃定温箱中经8小时后,同上述计算孢子发芽率,每一温度5重複。为瞭解病原菌菌丝生长的最适温度,在PDA平板上各接种培养4天的8mm圆径PP-1菌株之同生长势滤纸菌丝块于培养基中央;在5-35℃间隔5℃每日照光12小时培养箱中,经培养6天后,测量菌落的纵横直径,再减去原先接种源8mm圆径,每温度5重複。同上述菌丝生长试验,在各温度培养10日后,每培养皿加入无菌水10ml洗下孢子,取1滴于血球计数器(haemacytometer)以400倍视野计算大格中的孢子数,共逢机计算12个大格并换算为其浓度,即平均每大格中的孢子数乘以2.5X105,再乘以稀释的倍数,即为每1ml中孢子的浓度。而每一大格中的孢子数应落在2-6个之间,若镜检所得数目大于6时,则再稀释后镜检及换算(7),比较不同温度下的产孢情形
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