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本文标题："地黄炮制前后其他药理活性之比较!抗肿瘤细胞生长活性"
新闻来源：未知 发布时间：2012-3-29 1:26:31 本站主页地址：http://www.jiance17.com
地黄炮制前后其他药理活性之比较
一、材料
本研究制备之三批一五九蒸晒熟地黄重庆行生地沅方生地沅
方九蒸晒熟地黄。
二、实验方法
1.抗肿瘤细胞生长活性
本实验将探用两种癌细胞株（肝胞细胞Hep 3B，前列腺癌细胞PC 3）来
评估其地黄炮制前、中、后各分画之抗癌活性。细胞数目将MTT以法来测定，
同时为了区别是否为直接细胞毒性，将测定Lactate dehydrogenase (LDH)以兹区
别。
2.抗氧化、自由基清除活性
DDPH为一稳定氮属自由基，其517 nm吸光值约为1.12。当测试成分具
有自由基清除能力时，吸光值会明显地下降。而评估测试成分清除自由基能力
的依据是30分钟内使吸光值517 nm降低0.20单位时其所需之浓度（IC 0.20）表
示之。
3.抗血小板凝集活性
以EDTA 当抗凝血剂来制备富血小板血浆(Platelet-rich plasma, PRP)，以本
实验室发表之方法来洗涤，并制成血小板悬浊液(platelet suspension)。在各种不
同之引发剂（如ADP, collagen, thrombin, Platelet-activating factor），以混浊度法
来测定血小板凝集之程度。
4.纤维蛋白溶解作用
上述之血浆加入地黄抽取物后，以凝血产生凝血后，观察血块溶解之时
间，以判断是否可缩短纤溶时间。
5.血管平滑肌之增生
将自大鼠胸腔取出血管，剪碎培养，并以trypsin将细胞打下，进行续代培
养到第三到第八代。地黄之抽取物在与血管平滑细胞存在下，以各种增生剂（10
% FBS, PDGF, thrombin），经48 小时后，以MTT 法测定细胞数目。
6.对骨髓造血系统之影响
(1)血液学研究
第一批一蒸晒之地黄抽出液以1g/kg及5g/kg 口服灌食ICR小鼠，每组各
5 只，另取5 只只灌食0.5ml 生理食盐水做为对照。灌食后6、12、24 小时从
尾静脉采血做涂抹片，经Wright 染色液染色后,以油镜观察，并计算嗜中性球、
嗜酸性球、嗜碱性球与淋巴球之数值
(2)股骨骨髓细胞学
第一批一蒸晒之地黄抽出液以1g/kg及5g/kg 口服灌食ICR小鼠，每组各
5 只，另取5只只灌食0.5ml 生理食盐水做为对照。灌食后12 小时，将ICR小
鼠以dislocation方法安乐死，迅速取出股骨，其中之骨髓以冰过之Hank's Buffer
Solution(HSS)冲出，经离心(230xg 10mim)洗涤后，以0.5ml HSS 溶出，做成涂
抹片，以冰醋酸固定处理，染色后用显微镜观察。
7.对免疫系统之影响
第一批、第二批及沅方九蒸晒地黄水抽出液，分别以25mg/kg与250mg/kg
二种浓度注射于ICR小鼠腹腔，连续五天，每一浓度使用10 只ICR小鼠。实
验前及地黄抽出液注射后第5天和第8天，所有ICR小鼠先由尾静脉采血，放
置4℃使其凝固，经离心取上清液，保存于-70℃冰箱待测。以R&D 公司之
Quantikine
®
M 测定ICR 小鼠注射地黄抽出液后血中Iinterleukin-4 及
Interleukin-12 的变化。注射25mg/kg者每组取4只，250mg/kg者每组取5 只做
测定。
(1)Lymphoproliferation assay：动物安乐死后，在无菌箱取出脾脏细胞洗
涤后，置于含10 %胎牛血清之RPMI 1640 培养液后，分注于培养皿。
在37°C培养48小时后，加入3
H thymidine，再经18小时后，收取细
胞做放射性计数。
(2)Total immunoglobulin assay：以ELISA Test Kit 测定。
(3)Cytokines assay：Interleukin(IL)-1、IL-2、IL-12 等，以ELISA Test Kit
测定。
结果与讨论
(一)在抗癌活性分析方面：
以人类前列腺肿瘤细胞(PC-3)及人类肝肿瘤细胞(HA22T)来作实验，结果
发现生地黄及一至九蒸晒地黄对于PC-3（附件四图一）都没有任何毒杀能力；
对于肝肿瘤细胞（附件四图二）的毒杀作用，则发现第二批五蒸晒之地黄、第
三批一蒸晒地黄及重庆行生地黄有少许的肿瘤细胞毒杀作用，但作用太小，真
实意义不大。此外，若细胞培养液中含有10%胎牛血清，则上述作用即消失，
其解释原因为：1.可能是实验中有误差值，因实验值改变不大，故少许的误差
即造成统计上没有意义了；2. 有可能地黄成分与血浆蛋白结合，使其作用消失
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