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蒲葵; 内生栖生菌; 核糖体核糖核酸; 聚合酵素连锁反应; 亲缘关系
内生真菌是指在其生活史中的某一段时期生活在植物组织内,对植物组织没有引起明显病害症状的真菌。内生真菌研究是近二十年来比较活跃的新领域,它丰富了我们对真菌生物多样性的认识。目前,内生真菌研究的基本步骤为:植物组织的表面消毒,在营养培养基上培养植物组织,内生真菌的分离和纯化,根据经典形态学方法鑑定菌种。在此研究过程中,即使我们用不同的营养培养基和在不同的培养条件下培养植物组织,也不能保证所有生活在植物组织内的真菌全被分离出来,可能有的内生真菌不能在人工培养基上生长;另外,虽然在分离营养培养基中加入一些抑制真菌增长的化学物质,但是还是有一些生长缓慢的真菌常被生长快的真菌所覆盖,同样很难分离到这类生长缓慢的真菌。为了克服现行经典研究方法带来的缺陷,我们用分子生物学技术直接从植物组织内检测和鑑定内生真菌。健康的蒲葵树叶经过表面消毒后,用CTAB法提取总DNA,然后用PCR扩增 rDNA的ITS(ITS1, 5.8S, ITS2)片段,将PCR产物选殖到pGEM上,测定选殖的碱基序列
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