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新闻来源：未知 发布时间：2012-3-24 2:27:52　本站主页地址：http://www.jiance17.com

农药名称： 

普通名称：苏力菌 

生物学名：Bacillus thuringiensis 

剂型：水悬剂(SC)、可湿性粉剂(WP)、粒剂(GR)、水分散性粒剂(WG)。 

作用：杀虫剂。 

分析方法： 

1. cry1Ac杀虫基因转殖萤光假单孢菌的苏力菌产品： 

1.1.原理：不含活孢子之杀虫毒蛋白基因转殖萤光假单孢菌的苏力 菌产品（含Cry1Ac杀虫蛋白质），

无法以NA培养基培养，蛋白 质产物可以SDS-PAGE分离及以ELISA确认。 

1.2.适用范围：cry1Ac杀虫基因转殖萤光假单孢菌的苏力菌产品。 

1.3.检验方法： 

1.3.1.供试样品处理：样品取0.01g以1 ml无菌水振荡悬浮稀释， 再继续稀释至1/1000倍，于1000倍位相差显微镜下镜检

观察其菌体及内含结晶之形态，并在NA（nutrient agar） 平板培养基以划线法纯化，测试是否可被培养。 

1.3.2.总蛋白量之分析：苏力菌产品以之蛋白质含量含量检定套 组，以胎牛血清蛋白(BSA)为标准剂，测定供试苏力菌总蛋 白浓度，

其后调整样品之浓度备用。 1.3.3. SDS-聚丙烯醯胺胶体电泳分析(SDS-PAGE)：将苏力菌产 品，依Dunn (1993)及段等(1993)之方法，并以Cry1Ac蛋白 质为正对照组，进行蛋白质成份电泳分离。 

1.3.4.酵素联结免疫检定(ELISA)检测特定毒蛋白含量：经1.3.1 定量之苏力菌样品及Cry1Ac标准品，以coating buffer稀 释，使浓度为0.2-0.5μg/ 50μl，将之加至EIA 96孔盘 中(50μl/孔)，置于37℃，4小时，倒掉盘中液，每孔加100 μl blocking solution，于37℃作用30分钟，以washing buffer (0.05% PBST)洗三次，晾干，保存于-20℃备用。 每 孔加50μl经PBS稀释之Cry1Ac免疫血清，于37℃下，作 用90分钟，以washing buffer洗三次，加入alkaline phosphatase-conjugated affinity pure goat anti -rabbit IgG (H+L) 2,500倍稀液(100μl/孔)，于37℃下作用60 分钟，再以washing buffer洗五次，加入0.1% PNPP受质 呈色液，于37℃下作用60分钟，以ELISA判读机于405nm下 判读。 以已知样品之蛋白含量对应吸光值(OD)求出相关方程 式，并换算出未知样品之浓度