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本文标题："快速鉴定肠道杆菌科细菌及其他革兰氏阴性菌！"
细菌快速鉴定方法
一、目的
应用迷你多项生化检测系统（miniaturized multi-test systems）快速鑑定细菌。
本试验以 API 20E 简易鑑定套组为例，鑑定肠道杆菌科细菌及其他革兰氏阴性菌。
二、原理
API 20E 套组有 20 个小管，内含特定的乾燥基质，可进行 23 种生化试验之判
读。各项生化试验依判读标准表判读及记录，再计算出 7－9 个数字之菌码
（profile
number）
，最后应用菌码索引（analytic profile index）查出该菌码所对应之细菌菌
名，即为待测细菌之菌种名称。
三、材料与设备
(一) 材料
1. 培养18-24小时之纯化Klebsiella pneumoniae
2. API 20E 细菌快速鑑定套组。
(二) 设备
1. 培养箱
四、方法与步骤
1. 将待测细菌进行氧化 （oxidase）试验，确定为阴性反应后再进行以下试
验。
2. 加 5 ml 水至培养托盘内之孔洞中，以保持盒内之湿度，并在盘上进行标示。
3. 取出 API 20E 快速鑑定套组并置入培养托盘内。
4. 加 5 ml 之无菌蒸馏水至无菌试管内。
5. 挑取 1-2 个纯化之菌落并悬浮至无菌蒸馏水中。
6. 于各试验孔之管中 (tube) 加满菌液。
7. 在 CIT, VP 及 GEL 试验孔之管头 (cupule) 加满菌液。
8. 在 ADH、LDC、ODC、H2S、URE 试验孔上加入无菌矿物油。
9. 盖上培养盖，于 37℃培养 18~24 小时后进行判读。
10. 先将不需加加入试剂即可判读之各项试验进行判读 (参考判读表) 并记
录。
1) 若 GLU 呈阳性及／或 3 个以上试验呈现阳性则在以下试验孔加入试剂后
判读：
TDA 试验 – 在 TDA 试验孔加入一滴 TDA 试剂后即可判读；
IND 试验 -- 在 IND 试验孔加入一滴 James 试剂后判读；
VP 试验 -- VP 试验孔加入 VP1 及 VP2 试剂各一滴，10 分钟后判读；
NO2 还原试验 -- 在 GLU 试验孔加入 NIT1 及 NIT2 试剂各一滴，2~3
分钟后判读。若为阴性反应 (黄色) 则加入 2-3 mg 锌粉，5 分钟后若仍
呈黄色则为阳性反应，若呈红色则为阴性反应。
2) 若 GLU 为阴性且其他反应呈阳性者少于２个，则将 API 套组再培养 24小时后如同上述加入各种试剂并进行判读。