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本文标题："照光培养与暗培养对癒合组织诱导的影响！"
盆栽迷迭香叶面具有许多绒毛，叶背呈凹陷状，内藏许多油胞，造成灭
菌不易。可先行将盆栽迷迭香移至室内二週，每三天喷洒亿力(Benlate,杜
邦)1000倍稀释液，进行初步之淨化；再取枝条上端新长出之细嫩部分，利
用0.5﹪次氯酸钠(NaOCl)溶液，加2滴/100ml展着剂Tween-20，激烈振盪
进行表面消毒10分钟，最后以无菌水冲洗数次后备用，进行以下的试验。
一、照光培养与暗培养对癒合组织诱导的影响
将灭菌过的叶片材料，切成0.6㎝长之片段，作为诱导癒合组织之培
植体，培养于含有Thiamine·HCl0.4mg/l、Pyridoxine·HCl0.5mg/l、Nicotinic
acid0.5mg/l、Myo-Inositol100mg/l、Glycine1.0mg/l、4﹪(w/v)Sucrose
、20﹪(v/v)coconutwater及0.8﹪Merckagar的VW(26)基本盐类固体培养
基(pH=5.3)，添加2,4-D(2,4-dichlorophenoxyaceticacid)5mg/l及
BA(6-benzyladenine)0.5mg/l等生长调节剂浓度，于温度25±1℃，光强度
1,750lux，进行每日16小时之照光培养及暗培养二种处理，每一处理30
个培植体，二个月后调查癒合组织的诱导率及组织质地。癒合组织诱导率为
计算未褐化死亡、培植体表面增生绿色或土黄色癒合组织团所佔的比率。
二、不同浓度BA与NAA对癒合组织增殖的影响
将叶培植体置于2,4-D5mg/l、BA0.5mg/l浓度下，经照光培养或暗培
养所诱得的癒合组织，切成直径约5㎜，培养于含有adeninesulfate40mg/l
、NaH2PO4·H2O170mg/l、3﹪Sucrose及1﹪Merckagar之MS(22)固体培
养基(pH=5.2)，配合BA0,2,4,8mg/l及NAA0,0.01,0.05,0.1,0.2mg/l
，作为癒合组织增殖之试验培养基。每一处理9~15团癒合组织，採每日16
小时照光培养，四週后调查癒合组织之存活率、具增殖个体比率及癒合组织
之增殖效率。癒合组织增殖率估算方式为由生长良好的癒合组织培植体直接
再生癒合组织，或从部分褐化的培植体长出新的癒合组织者。
三、不同浓度抗氧化剂与渗透压调节剂处理对减低癒合组织褐化及芽体再生之影响
迷迭香癒合组织增殖后期，极易于表面产生褐化现象，分化产生的芽
原体也容易形成水浸状、玻璃质化。将癒合组织同样分切成直径约5㎜，利
用癒合组织增殖培养基，配合0,500,1000,1500,2000mg/l等不同浓度褐
化物质吸附剂PVP(polyvinylpyrolidone,m.w.＝40000,Sigma)，期望能有
效与酚类化合物键结，减少氧化产物对显微镜下观察细胞的伤害，降低癒合组织的褐化率
，或渗透压调节剂山梨糖醇(D-sorbitol,Sigma)0,0.1,0.2,0.3,0.4M处理，
减少癒合组织含水量，改善水浸状现象；相同培养基并同时作为诱导芽体分
用，比较植株再生过程，降低芽体玻璃质化现象及产生正常芽体之影响
。每一处理培养15团癒合组织，共4个重複，四週后调查癒合组织改变情
形及芽体外观。
四、悬浮显微镜下观察细胞系之建立
将迷迭香叶片材料于光照培养下诱导产生的癒合组织切碎，利用0.5
㎜、0.71㎜、1.0㎜大小筛网滤过后，各取5ml显微镜下观察细胞液，分别培养于含有20ml
增殖培养基之125ml具侧管三角瓶中(图1A)，以100rpm转速之迴旋振盪器
振盪培养，培养温度25±1℃，光强度1000lux，进行每日16小时之照光培
养。每日测量一次体积，测量体积时须注意溷匀显微镜下观察细胞及培养液，调查其在侧
管中增加的显微镜下观察细胞沉降体积，以建立悬浮培养之生长曲线；每隔18天作一次
继代培养，继代培养时需以筛网过滤后，去除较大之老显微镜下观察细胞团，再将悬浮细
胞液移至新的培养基继续培养，每种处理5瓶三角瓶，重複六次生长曲线测
定，探讨悬浮培养时显微镜下观察细胞组织之最适当大小，作为利用生物反应器或大量培
养时之参考。
http://www.xianweijing.org/ 显微镜
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