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本文标题："植物病毒诊断之酵素连结抗体法！显微镜-金相显微镜专卖！"
酵素连结抗体法(ELISA=Enzyme linked immunosorbent assay)：
首先将抗血清中之主要抗体 IgG 纯化出来，利用戊二醛本身所具的醛基容
易和氨基发生连结的性质形成酵素连结抗体，或利用过碘酸钠先将含有五碳糖
酵素氧化形成醛基后再和抗体的氨基连接形成酵素连结抗体，或将纯化后的抗
体 IgG 先以胃蛋白酵素分解去除抗体 Fc 非特异附着部位后，所得抗体(Fab’)2
片段所持有的-SH 基，再利用马来醯亚胺或二硫化吡啶基和含有-SH 基的酵素
连结而得到酵素连结抗体。利用 ELISA 诊断有许多检查的方法，在侦测已未经
纯化之材料为被检体时，常用的基本检查法是双抗体包夹法(Double antibody
sandwich ELISA)最为普遍，其检查过程简述如下：
1 首先将已知抗体吸附在 96 穴检查盘
37 ℃下反应 1-2 hr 或室温反应 4-6 小时或 4 ℃下隔夜
↓
2
以洗涤液洗涤后
↓
3
各穴放入各种被检体，
37 ℃下反应 1-2 hr 或室温反应 4-6 小时或 4 ℃下隔夜
↓
4
再以洗涤液洗涤
↓
5
各穴加入稀释后的酵素连结抗体，
37 ℃下反应 1-2 hr 或室温反应 4-6 小时或 4 ℃下隔夜
↓
6
再以洗涤液洗涤
↓
7
加入酵素基质，室温下反应 15-60 分钟
↓
反应完全后，加入 3 N 的 NaOH 溶液停止反应
若被检体内有抗原(病原)存在，虽然以肉眼无法观察到的微弱抗体抗原反应发
生，由于抗体上连有酵素，而酵素遇到其基质则会反应呈色的原理，也就容易用肉
眼从酵素的呈色而得知有抗原(病原)的存在。
上述过程中之酵素连结抗体，係连结在一次抗体上，若连结在二次抗体(即以兔子
免疫注射而来之抗体为抗原，再免疫注射至不同动物如羊所产生之抗体谓之二次抗
体)上，则所得之酵素连结抗体，以后检查时只要是由兔子而来之不同种类抗血清，
该连结抗体皆可共用。需要检查的病毒种类多时较方便，有人称之谓 Indirect
ELISA，惟灵敏度及特异性反应较连结在一次抗体的 Direct ELISA 为低。
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