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本文标题："组织切片显微镜观察的技巧？显微镜小知识！"

石蜡切片观察
目的  学习组织切片观察的技巧
原理  石蜡切片的原理是将样本的组织灌入石蜡,使得其质地像石蜡一般(想想化石形成的原理),才能既而将其切成约10μm的薄片而不损坏样本的构造形状。样本应依序经由
1)固定.
2)脱水
3)包埋.
4)切片.
5)染色及
6)封片
等步骤製作成可观察及保存的玻片标本.
材料  美国螯虾1公分的幼虾(或其他没有过硬外骨骼之小样本皆可)
设备  rotary microtome(迴旋式切片机)
water bath(水浴槽)
hotplate(加热板)
light microscope(光学显微镜)
真空抽气机(可定温)
石蜡填充机
数位相机
电脑及影响编辑软体
slide, coverslip
染缸若干
玻片架若干
药品  Mayer's glycerol albumen(蛋白胶)
Xylene(histosol)(清洗剂－脱酒精，使组织透明化)
70%,80%,95%,100% alcohol(脱水剂)
Eosin
Mayers haematoyline
synthetic mount(封片胶)
石蜡
步骤  1. 固定: 在实验开始前1-3天将活的标本浸泡于福马林(formalin)中固定，若样本有外骨骼，体积又相对的较大(1cm)时可以细解剖刀片在其表面划几刀使福马林较易渗入。
2. 脱水: 依序由低浓度到高浓度(最后为100%)的酒精渐进脱水
70% alcohol 1.5hr
80% alcohol 1hr
95% alcohol 1hr
95% alcohol 1hr
100% alcohol 1hr
100% alcohol 1.5hr
histosol 1.5hr for dealcoholization
histosol 1.5hr
3. 包埋: 将样本置于样本皿中间底部，填充石蜡(石蜡填充机要先预热使石蜡融化),真空抽气使石蜡渗入组织(65℃)，之后由65℃真空抽气机中取出后静置待其自然冷却。
wax (with vacuum) 1.5hr
再填一次wax(with vaccuum) 1.5hr
4. 切片:将样本周围多出的蜡块以单面刀片修去，修成合适的梯形。将样本卡于切片机的样本放置处，设定好角度使梯形的上下边与刀片平行，并使突出的面恰与刀片相接。安置好样本后，调整切片机刀片的角度(约10度)及切片厚度(约10μm)，转动把手切片，使切片成带状且不捲曲(若不能则再检查刀片，角度等因素作适度调整)，用水彩笔轻挑至温水(45℃水浴槽)中展蜡,用事先准备好之沾有蛋白胶之玻片(需确定玻片上的蛋白胶已够乾之后样本才不会在染色过程中脱落)捞起蜡片并烘乾(45℃加热板)
5. 染色: 将沾有样本的玻片排列于铁架中，依下列顺序经各染色缸中染色。注意回水及脱水的程序及染色时间，可尝试不同的染色时间已得到最好的效果:
xylene 15min
xylene 15min
100%alcohol 6dips 以下四步为脱蜡回水步骤
95%alcohol 6dips
80%alcohol 6dips
70%alcohol 6dips
water 15min
Mayers haematoyline 约10min　以下三步为染色步骤
Water 10min
Eosin 6dips
70%alcohol 6dips
80%alcohol 6dips
95%alcohol 6dips
95%alcohol 6dips
100%alcohol 6dips
100%alcohol 6dips
xylene 10min 脱酒精
xylene 10min
6. 观察颜色是否适当,是的话用封片胶封片,注意避免产生气泡
7. 将欲观察的部位在光学显微镜下以数位相机拍照，再用影像编辑软体组合，纪录。
时间  样本准备1-3天，脱水1天，切片＋染色＋封片观察约3hr
备注  通常样本的准备(1)-(2)需要1-3天